96 Test-Ausrüstungen des Test-ELISA für Kanamykin-Entdeckungs-hohe Reproduzierbarkeit

Kanamykin ELISA Test Kit

Produkt-Beschreibung

REAGEN-^™ Kanamykin ELISA Test Kit ist ein wettbewerbsfähiger Enzym Immunoassay für die quantitative Analyse des Kanamykins im Fleisch/in der Leber/in der Niere, im Zellen-lysate, im Urin, im Serum und in der Milch.

Die einzigartigen Eigenschaften der Ausrüstung sind:

• Hohe Wiederaufnahme (>80%), schnell (10-40 Minuten) und kosteneffektive Extraktionsmethoden.

• Nachweisgrenze ist 0,2 ng/g.

• Hohe Reproduzierbarkeit.

• Eine schnelle ELISA-Probe (weniger als 1 Stunden unabhängig davon Zahl von Proben).

Verfahrens-Überblick

Die Methode basiert auf einer wettbewerbsfähigen kolorimetrischen ELISA-Probe. Das Kanamykin-BSA ist in den Plattenbrunnen beschichtet worden. Während der Analyse, der Probe und des Kanamykinantikörpers (Antikörper #1) und HRP-Paronym (HRP-konjugierter Antikörper #2) werden den Brunnen für Ausbrütung hinzugefügt. Wenn der Kanamykinrückstand in der Probe anwesend ist, konkurriert er mit dem Kanamykin auf den Plattenbrunnen für den Kanamykinantikörper, der Sekundärantikörper, etikettiert mit einem Peroxydaseenzym, Ziele der Primärantikörper, der zur Droge komplex ist, die auf den Plattenbrunnen beschichtet wird. Die resultierende Farbintensität, nach Zusatz des HRP-Substrates (TMB), hat ein umgekehrtes Verhältnis zur Kanamykinrückstandkonzentration in der Probe.

Kit Contents, Lagerung und Haltbarkeitsdauer

REAGEN-^™ Kanamykin ELISA Test Kit hat die Kapazität für 96 Bestimmungen oder die Prüfung von 42 Proben in doppelter Ausführung (12 Brunnen für Standards annehmend). Bringen Sie alle unbenutzten microwells zur Folientasche zurück und versiegeln Sie sie mit dem Trockenmittel wieder, das im ursprünglichen Paket bereitgestellt wird. Speichern Sie die Ausrüstung an 2-8°C *. Die Haltbarkeitsdauer ist 12 Monate, als die Ausrüstung richtig gespeichert wird.

Wenn Sie nicht planen, die Ausrüstung für 1-monatiges vorbei zu benutzen, HRP-konjugierte Speicher Kanamykin-Standardaktie, Kanamykin-Antikörper #1and Antikörper #2 an -20°C oder in einem Gefrierschrank.

Empfindlichkeit (Nachweisgrenze)

Besonderheit (Kreuzreaktivität)

Erforderliche Materialien versehen nicht mit der Ausrüstung

• Mikrotiterplattenleser (450 Nanometer)

• Gewebe-Mischer (z.B. Omni-Gewebe-Haupthomogenisierer)

• Turbulenzmischer (z.B. Genie Vortex-Mischer von VWR)

• UL-Pipetten 10, 20, 100 und 1000

• Mehrkanalpipette: 50-300 UL (optional)

Warnungen und Vorkehrungen

• Die Standards enthalten Kanamykin. Griff mit bestimmter Sorgfalt.
• Benutzen Sie nicht die Ausrüstung hinter dem Verfallsdatum.
• Vermischen Sie Reagenzien von den verschiedenen Ausrüstungen oder Lose nicht außer Komponenten mit der gleichen Teilnummer innerhalb ihrer Verfalldaten. ANTIKÖRPER UND PLATTEN SIND KIT-AND LOT-SPECIFIC.
• Versuchen Sie, eine Labortemperatur von 20°-25°C (68°-77°F) beizubehalten. Avoid Betrieb prüft unter oder nahe Belüftungsöffnungen, da dieser möglicherweise das übermäßiges Abkühlen, Heizung und/oder Verdampfung verursacht. Auch lassen Sie nicht Proben im direkten Sonnenlicht laufen, wie dieses möglicherweise übermäßige Hitze und Verdampfung verursacht. Kalte Bankspitzen sollten vermieden werden, indem man Tuch einiger Papierschichten oder etwas Anderes Isoliermaterial unter den Probenplatten während der Ausbrütung setzt.
• Vergewissern Sie sich, dass Sie mit nur oder entionisiertes Wasser destillieren, da Wasserqualität sehr wichtig ist.
• Wenn Sie Proben oder Reagenzien in eine leere Mikrotiterplatte pipettieren, legen Sie die Pipettenspitzen in die untere Ecke des Brunnens und Kontakt mit dem Plastik aufnehmen.
• zeit Ausbrütungen von Probenplatten sollten so genau festgesetzt werden, wie möglich. Seien Sie konsequent, wenn Sie Standards der Probenplatte hinzufügen. Addieren Sie Ihre Standards zuerst und dann Ihre Proben.
• Addieren Sie Standards, um nur im Auftrag von der niedrigen Konzentration zur hohen Konzentration zu überziehen, da dieses das Risiko des Kompromittierens der Standardkurve herabsetzt.
• Kühlen Sie immer Platten in Siegeltaschen mit einem Trockenmittel, um Stabilität beizubehalten. Verhindern Sie Kondensation an der Formung auf Platten, indem Sie sie zur Raumtemperatur abgleichen lassen (20 – 25°C/68 – 77°F) während im Verpacken.

Seien Sie sicher, dass Proben richtig gespeichert werden. Im allgemeinen sollten Proben an 2-4°C für nicht mehr als 1-2 Tage gekühlt werden. Frostproben zu einem Minimum -20°C, wenn sie während eines längeren Zeitraums gespeichert werden müssen. Gefrorene Proben können an Raum Temps (20 – 25°C/68 – 77°F) oder in einem Kühlschrank vor Gebrauch aufgetaut werden.

• Vorbereitung des Verdünnungsmittels 1×Sample: Mischung 1 Volumen Verdünnungsmittel 10×Sample mit 9 Volumen destilliertem Wasser.
• Vorbereitung des Außenpuffers 1×Sample: Mischung 1 Volumen des Außenpuffers 10×Sample mit 9 Volumen destilliertem Wasser.

Zelle Lysate

• Nehmen Sie UL 100 von Zellen-lysate, fügen Sie UL 900 von Verdünnungsmittel 1×Sample Puffer hinzu, mischen Sie gut.

• Zentrifuge für 5 Minuten bei 4000 x G.

• Nehmen Sie UL 50 vom schwimmenden pro Brunnen für die Probe.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 10.

Garnelen-/Fisch-Fleisch/Leber/Niere

• Bis 1,0 g der homogenisierten Probe, fügen Sie 4.0mL des Außenpuffers 1×Sample hinzu,

• Turbulenz die Probe für Minuten 1 mit Turbulenzmischer.

• Zentrifugieren Sie die Probe für 5 Minuten bei 4.000 x G.

• Übertragen Sie sorgfältig 200uL der Oberschicht auf ein neues Rohr, addieren Sie 1.375mlVerdünnungsmitteldesBeispiel1Xund25uLdesBeispielbalancen-Puffers, Turbulenzfür30Sekunden.

• Verwenden Sie 50uL pro Brunnen für die Probe.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 40.

Urin/Serum

• Nehmen Sie 50uL des Urins, oder Serumprobe, addieren 1,2 ml Verdünnungsmittel des Beispiel 1X, mischen gut.

• Zentrifuge für 5 Minuten bei 4.000 x G.

• Nehmen Sie 50uL vom schwimmenden pro Brunnen für die Probe.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 25.

Milch

• Fügen Sie 100uL der Milchprobe in ein Zentrifugenrohr hinzu, fügen Sie 900uL Verdünnungsmittels des Beispiel 1X hinzu.
• Turbulenz kräftig für 30 Sekunden.
• Zentrifuge bei 4.000 x g für 10 Minuten.
• Verwenden Sie 50uL der schwimmenden Probe für die Probe.

Anmerkung: Verdünnungs-Faktor: 10

TEST-AUSRÜSTUNGS-PROTOKOLL DES KANAMYKIN-ELISA

Reagens-Vorbereitung

WICHTIG: Alle Reagenzien sollten bis zur Raumtemperatur vor Gebrauch geholt werden (1 – 2 Stunden bei 20 – 25°C/68 –°F 77); Vergewissern Sie sich, dass Sie gelesener „Warnungs- und Vorkehrungs“ Abschnitt auf Seite 3. Lösungen gerade vor ELISA-Test vorbereitet werden sollten. Alle Reagenzien sollten gemischt werden, indem man leicht vor Gebrauch umwandelt oder wirbelt. Bereiten Sie Volumen vor, die für die Anzahl von den Brunnen erforderlich sind, die laufen gelassen werden. Bringen Sie die Reagenzien nicht zu den Stammaktierohren/-flaschen zurück. Unter Verwendung der Wegwerfreservoire wenn kann die Behandlung von Reagenzien das Risiko der Verschmutzung herabsetzen und wird empfohlen.

• Vorbereitung der Lösung der Wäsche-1X

Mischung 1 Volumen der Lösung der Wäsche-20X mit 19 Volumen destilliertem Wasser.

ELISA Testing Protocol

Beschriften Sie die einzelnen Streifen, die und Aliquotereagenzien als das folgende Beispiel benutzt werden:

• Fügen Sie UL 50 von jedes Kanamykin-Standards in doppelter Ausführung in verschiedene Brunnen hinzu (addieren Sie Standards, um nur im Auftrag von der niedrigen Konzentration zur hohen Konzentration zu überziehen).

• Fügen Sie UL 50 jeder Probe in doppelter Ausführung in verschiedene Beispielbrunnen hinzu.

• Fügen Sie UL 50 UL von HRP-Konjugieren Ab#2 jedem Brunnen und 50 des Kanamykin-Antikörpers #1 jedem Brunnen hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie leicht manuell die Platte für 30s schaukeln.

• Brüten Sie die Platte für 30 Minuten bei Zimmertemperatur aus (20 – 25°C/68 – 77°F). (Vermeiden Sie direktes Sonnenlicht und kalte Bankspitzen während der Ausbrütung. Abdeckung der Mikrotiterplatte, während das Ausbrüten empfohlen wird).

• Waschen Sie die Platte 4mal mit UL 250 der Lösung der Wäsche-1X. Nach der letzten Wäsche wandeln Sie die Platte um und klopfen Sie leicht das Plattentrockene auf Papierhandtüchern (führen Sie den nächsten Schritt sofort nach Plattenreinigungen durch. Lassen Sie die Platte nicht zwischen Arbeitsgängen lufttrocknen).

• Fügen Sie UL 100 von TMB-Substrat hinzu. Setzen Sie Zeit Reaktion sofort nach dem Addieren des Substrates fest. Mischen Sie die Lösung, indem Sie leicht manuell schaukeln die Platte für 30s beim Ausbrüten (setzen Sie kein Substrat zurück zu dem ursprünglichen Behälter, um jede mögliche Verschmutzung zu vermeiden. Jede mögliche Substratlösung, die Färbung aufweist, ist von der Verschlechterung hinweisend und sollte weggeworfen werden. Abdeckung der Mikrotiterplatte, während das Ausbrüten empfohlen wird).

• Nachdem Sie bei Zimmertemperatur für 15 Minuten ausgebrütet haben (°F 20 – 25°C/68 – 77), fügen Sie UL 100 des Endpuffers hinzu, um die Enzymreaktion zu stoppen.

• Lesen Sie die Platte, die so bald wie möglich der Einführung des Endpuffers auf einem Plattenleser mit 450 Nanometer der Wellenlänge folgt (vor Lesung, benutzen Sie ein fusselfreies Abwischen auf der Unterseite der Platte, um sicherzustellen, dass keine Feuchtigkeit oder Fingerabdrücke die Lesungen behindern).

Kanamykin-Konzentrations-Berechnungen

Eine Standardkurve kann konstruiert werden, indem man die relative Mittelabsorption (%) erreichte von jedem Referenzstandard gegen seine Konzentration in ng/mL auf einer logarithmischen Kurve grafisch darstellt.

Relative Absorption (%) = nullstandard oder Probe x 100 der Absorption

Verwenden Sie die relativen Absorptionsmittelwerte für jede Probe, um die entsprechende Konzentration der geprüften Droge in ng/mL von der Standardkurve zu bestimmen.

Die folgende Zahl ist eine Standardkurve des typischen Chloromycetins.