96 Test ELISA-Testkits für die Detektion von Kanamycin mit hoher Reproduzierbarkeit

Kanamycin-ELISA-Test-Kit

Beschreibung des Produkts

REAGEN^TMKanamycin ELISA Test Kit ist ein wettbewerbsfähiger enzymatischer Immuntest zur quantitativen Analyse von Kanamycin in Fleisch/Leber/Niere, Zelllysat, Urin, Serum und Milch.

Die einzigartigen Merkmale des Kits sind:

• Hohe Rückgewinnung (> 80%), schnelle (10-40 Minuten) und kostengünstige Extraktionsmethoden.

• Nachweisgrenze 0,2 ng/g.

• Hohe Reproduzierbarkeit.

• Eine schnelle ELISA-Analyse (weniger als 1 Stunde, unabhängig von der Anzahl der Proben).

Übersicht über das Verfahren

Die Methode basiert auf einem wettbewerbsfähigen kolorimetrischen ELISA-Assay.Probe und Kanamycin-Antikörper (Antikörper Nr. 1) und HRP-Konjugat (HRP-Konjugat-Antikörper Nr. 2) werden den Brunnen zur Inkubation hinzugefügt.Wenn der Kanamycin-Rückstand in der Probe vorhanden ist, wird er mit dem Kanamycin auf den Plattenbrunnen um den Kanamycin-Antikörper konkurrieren.richtet sich an den primären Antikörper, der auf dem auf den Plattenbrunnen beschichteten Arzneimittel komplexisiert istDie ermittelte Farbintensität hat nach Zugabe des HRP-Substrats (TMB) einen umgekehrten Zusammenhang mit der Kanamycinrückstandskonzentration in der Probe.

Inhalt, Aufbewahrung und Haltbarkeit

REAGEN^TMDas Kanamycin-ELISA-Test-Kit kann 96 Bestimmungen oder die Prüfung von 42 Proben in zweifacher Form durchführen (unter Annahme von 12 Bohrlöchern für Normen).Alle nicht verwendeten Mikrowellen in den Folienbeutel zurückführen und mit dem in der Originalverpackung enthaltenen Trocknungsmittel wieder versiegelnDie Haltbarkeit beträgt 12 Monate, wenn das Kit ordnungsgemäß gelagert wird.

Wenn Sie das Kit nicht länger als einen Monat verwenden möchten, lagern Sie Kanamycin Standard Stock, Kanamycin Antibody #1 und HRP-Konjugierte Antibody #2 bei -20°C oder im Gefrierschrank.

Empfindlichkeit (Erkennungsgrenze)

Spezifität (Kreuzreaktivität)

Notwendige Materialien nicht im Paket enthalten

• Mikrotiter-Schildleser (450 nm)

• Gewebemischer (z. B. Omni-Tissue-Master-Homogenisierer)

• Vortexmischer (z. B. Genie Vortexmischer von VWR)

• 10, 20, 100 und 1000 IU Pipetten

• Mehrkanal-Pipette: 50 bis 300 IU (optional)

Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen

• Die Standards enthalten Kanamycin.
• Verwenden Sie das Kit nicht nach Ablauf des Verfallsdatums.
• Reagenzien aus verschiedenen Kits oder Partien dürfen nicht miteinander vermischt werden, mit Ausnahme von Komponenten mit derselben Bauteilnummer innerhalb ihres Verfallsdatums.
• Versuchen Sie, eine Labortemperatur von 20° ≈ 25° C (68° ≈ 77° F) aufrechtzuerhalten. Vermeiden Sie die Durchführung von Prüfungen unter oder in der Nähe von Lüftungsöffnungen, da dies zu übermäßiger Abkühlung, Erwärmung und/oder Verdunstung führen kann.Nicht in direkter Sonneneinstrahlung durchführen, da dies zu übermäßiger Hitze und Verdunstung führen kann.Während der Inkubation sollten kalte Bänkplatten vermieden werden, indem mehrere Schichten aus Papiertüchern oder einem anderen Isoliermaterial unter die Probenplatten gelegt werden..
• Stellen Sie sicher, dass Sie nur destilliertes oder deionisiertes Wasser verwenden, da die Wasserqualität sehr wichtig ist.
• Bei Pipettierung von Proben oder Reagenzien in eine leere Mikrotiterplatte legen Sie die Pipettenspitzen in die untere Ecke des Brunnens und setzen sie in Kontakt mit dem Kunststoff.
• Die Inkubation der Probenplatten sollte so genau wie möglich geplant werden.
• Es werden nur in der Reihenfolge von niedriger Konzentration bis zu hoher Konzentration Standards auf die Platte hinzugefügt, da dadurch das Risiko einer Beeinträchtigung der Standardkurve minimiert wird.
• Platten in versiegelten Beuteln mit einem Trocknungsmittel immer kühlen, um ihre Stabilität zu gewährleisten.Verhindern Sie die Bildung von Kondens auf den Platten, indem Sie sie während der Verpackung auf Raumtemperatur (20 25 °C / 68 77 °F) ausbalancieren lassen..

Stellen Sie sicher, dass die Proben ordnungsgemäß gelagert werden. Im Allgemeinen sollten die Proben nicht länger als 1-2 Tage bei 2-4°C gekühlt werden. Wenn sie länger gelagert werden müssen, sollten die Proben mindestens bei -20°C eingefroren werden.Gefrorene Proben können vor der Verwendung bei Raumtemperaturen (20°C / 68°F) oder im Kühlschrank aufgetaut werden..

• Zubereitung von 1 × Probeverwässungsmittel:Mischen Sie 1 Volumen 10×Probeverwässerungsmittel mit 9 Volumina destilliertem Wasser.
• Vorbereitung von 1 ×Stichproben-Ext. Puffer: 1 Volumen 10×Probe Ext. Puffer mit 9 Volumen destilliertem Wasser mischen.

Zelllysat

• Nehmen Sie 100 I.L. Zelllysat, fügen Sie 900 I.L. 1 × Probeverwässerungspulver hinzu, mischen Sie gut.

• Zentrifuge 5 Minuten lang bei 4000 x g.

• Für den Test nehmen Sie 50 I.L. des Supernatants pro Brunnen.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 10.

Garnelen/Fisch/Fleisch/Leber/Niere

• Zu 1,0 g der homogenisierten Probe werden 4,0 ml 1×Sample Ext. Puffer hinzugefügt.

• Wirbeln Sie die Probe für 1 Minute mit einem Wirbelmischer.

• Die Probe wird 5 Minuten lang bei 4.000 x g zentrifugiert.

• Vorsichtig übertragen 200uL der oberen Schicht in eine neue Röhre,1 hinzufügen.375 ml 1 x Probenverdünnungsmittel und 25 uL Proben-Balance-Puffer, 30 Sekunden lang vorwärts.

• Für den Test werden 50 uL pro Brunnen verwendet.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 40.

Urin/Serum

• Nehmen Sie 50uL Urin- oder Serumprobe, fügen Sie 1,2 ml 1x Probenverdünner hinzu und mischen Sie gut.

• Zentrifuge 5 Minuten lang bei 4.000 x g.

• Für den Test werden 50 uL des Supernatants pro Brunnen genommen.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor: 25.

Milch

• 100 uL Milchprobe in eine Zentrifuge hineinfügen, 900 uL 1x Probenverdünner hinzufügen.
• Wirbeln Sie 30 Sekunden lang kräftig.
• Zentrifugieren bei 4000 x g für 10 Minuten.
• Verwenden Sie 50uL der Übernatantprobe für den Test.

Anmerkung: Verdünnungsfaktor:10

KANAMYCIN ELISA-Test-KIT Protokoll

Aufbereitung von Reagenzien

WICHTIG: Alle Reagenzien sollten vor der Anwendung auf Raumtemperatur gebracht werden (1 2 Stunden am20 ¢ 25- Nein.C / 68 ¢ 77- Nein.F); Lesen Sie bitte den Abschnitt "Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen" auf der SeiteSeite3.Alle Reagenzien sollten vor der Anwendung durch sanfte Umdrehung oder Wirbelung gemischt werden.Die Reagenzien dürfen nicht in die ursprünglichen Lagerröhrchen/Flaschen zurückgegeben werden.Die Verwendung von Einwegbehältern beim Umgang mit Reagenzien kann das Kontaminationsrisiko minimieren und wird empfohlen.

• Herstellung von 1X Waschlösung

Mischen Sie 1 Volumen der 20X Waschlösung mit 19 Volumina destillierten Wassers.

ELISA-Prüfprotokoll

Die einzelnen zu verwendenden Streifen und die gleichwertigen Reagenzien werden wie folgt gekennzeichnet:

• 50 I.L. jedes Kanamycin-Standards in doppelter Form in verschiedene Brunnen geben (Standards nur in der Reihenfolge von niedriger Konzentration bis hoher Konzentration auf die Platte geben).

• 50 I.L. jeder Probe in doppelten Stücken in verschiedene Probengrube gegeben.

• 50 I.L. HRP-konjugierten Ab#2 und 50 I.L. Kanamycin-Antikörper #1 hinzufügen.

• Die Platte wird 30 Minuten lang bei Raumtemperatur (20°C / 68°F) inkubiert. (Vermeiden Sie direktes Sonnenlicht und kalte Bänke während der Inkubation (es wird empfohlen, die Mikrotiterplatte während der Inkubation zu bedecken).

• Waschen Sie die Platte viermal mit 250 I.L. 1 X Waschlösung. Nach dem letzten Waschen umdrehen Sie die Platte und klopfen Sie sanft auf Papierhandtücher auf die Platte (Erfüllen Sie den nächsten Schritt unmittelbar nach dem Waschen.Zwischen den Arbeitsschritten darf die Platte nicht an der Luft trocknen).

• Fügen Sie 100 L TMB Substrat hinzu. Zeit die Reaktion unmittelbar nach dem Hinzufügen des Substrates. Mischen Sie die Lösung, indem Sie die Platte sanft manuell für 30 Sekunden während der Inkubation schüttelnUm eine mögliche Kontamination zu vermeiden, darf kein Substrat in den ursprünglichen Behälter zurückgelegt werden.Es wird empfohlen, die Mikrotiterplatte während der Inkubation zu bedecken).

• Nach 15 Minuten Inkubation bei Raumtemperatur (20 ¢ 25- Nein.C / 68 ¢ 77- Nein.F), 100 I.L. Stop-Puffer hinzufügen, um die Enzymreaktion zu stoppen.

• Nach dem Hinzufügen von Stop-Buffer auf einem Plattenleser mit einer Wellenlänge von 450 nm muss die Platte so schnell wie möglich gelesen werden.Verwenden Sie einen flüssigkeitsfreien Tüftel auf der Unterseite der Platte, um sicherzustellen, dass keine Feuchtigkeit oder Fingerabdrücke die Messungen beeinträchtigen).

Berechnungen der Kanamycinkonzentration

Eine Standardkurve kann erstellt werden, indem die durchschnittliche relative Absorptionsrate (%) jedes Referenzstandards auf einer logarithmischen Kurve mit seiner Konzentration in ng/mL verglichen wird.

Relative Absorption (%) =Absorptionsstandard Nulloder Probe x 100

Verwenden Sie die mittleren relativen Absorptionswerte für jede Probe, um die entsprechende Konzentration des untersuchten Arzneimittels in ng/ml aus der Standardkurve zu ermitteln.

Die folgende Abbildung ist eine typische Chloramphenicol-Standardkurve.